Manfaat Kemajuan Mikroskop Multifoton Pemindaian Laser
Mikroskop multifoton pemindaian laser adalah peningkatan signifikan dalam mikroskop optik, terutama diwujudkan dalam kemampuan mengamati struktur dalam sel hidup, sel tetap, dan jaringan, serta mendapatkan struktur bidang-lapisan Z-multi-lapisan yang jelas dan tajam, yaitu irisan optik, yang dapat digunakan untuk membuat struktur padat tiga-dimensi pada spesimen. Mikroskop confocal menggunakan sumber cahaya laser, yang diperluas hingga memenuhi seluruh bidang fokus lensa objektif, dan kemudian dikonvergensi menjadi titik-titik yang sangat kecil pada bidang fokus spesimen melalui sistem lensa lensa objektif. Menurut bukaan numerik lensa objektif, diameter titik iluminasi paling terang adalah sekitar 0,25-0,8 μm, dan kedalamannya sekitar 0,5-1,5 μm. Ukuran titik confocal ditentukan oleh desain mikroskop, panjang gelombang laser, karakteristik objektif, pengaturan status unit pemindaian, dan properti spesimen. Kisaran iluminasi dan kedalaman mikroskop lapangan besar, sedangkan iluminasi mikroskop confocal difokuskan pada titik fokus aman pada bidang fokus. Keuntungan paling mendasar dari mikroskop confocal adalah ia dapat melakukan pemotongan optik halus pada spesimen fluoresen tebal (hingga 50 μm atau lebih), dengan ketebalan sekitar 0,5 hingga 1,5 μm. Rangkaian gambar irisan optik dapat diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah menggunakan motor stepper sumbu Z-pada mikroskop. Pengumpulan informasi gambar dikontrol dalam bidang yang aman dan tidak akan terganggu oleh sinyal yang dipancarkan dari lokasi lain pada spesimen. Setelah menghilangkan pengaruh fluoresensi latar belakang dan meningkatkan rasio signal-to-noise, kontras dan resolusi gambar confocal meningkat secara signifikan dibandingkan dengan gambar fluoresensi penerangan lapangan tradisional. Dalam banyak spesimen, komponen struktural yang rumit terjalin untuk membentuk sistem yang kompleks, namun setelah cukup banyak bagian optik yang dapat dikumpulkan, kita dapat menggunakan perangkat lunak untuk merekonstruksinya dalam tiga dimensi. Metode eksperimental ini telah banyak digunakan dalam penelitian biologi untuk menjelaskan hubungan struktural dan fungsional yang kompleks antara sel atau jaringan.
